大腸埃希氏菌廣泛存在于人和溫血動物的腸道中, 能夠在44.5℃發酵乳糖產酸產氣, IMViC(靛基質、 甲基紅、 VP試驗、 檸檬酸鹽)生化試驗為++--或-+--的革蘭氏陰性桿菌。 以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生狀況,推斷食品中腸道致病菌污染的可能性。
大腸埃希氏菌的生理特性
大腸埃希氏菌為革蘭氏陰性短桿菌,無芽胞,需氧或兼性厭氧,能發酵乳糖,周生鞭毛,能運動。
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細菌微生物矢量插圖橫斷面標記圖
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革蘭氏染色鏡檢圖
大腸埃希氏菌檢測中出鏡率最高的選擇性分離培養基—伊紅美藍瓊脂(EMB)
伊紅美藍瓊脂(EMB)作為大腸埃希氏菌的選擇性分離培養基廣泛應用于各行業的標準中。如:GB 4789.6-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗》;GB 4789.38-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗大腸埃希氏菌計數》;美國食品藥品管理局(FDA)《細菌分析手冊》第4章大腸菌群和大腸桿菌計數(BAM 4: Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria)和第4A章致瀉大腸埃希氏菌檢測(BAM Chapter 4A: Diarrheagenic Escherichia coli );
EMB的基本原理
原理:
蛋白胨在培養基中作為營養物質提供菌體細胞生長所需要的氮源及其它營養元素;乳糖為提供菌體細胞生長提供可發酵的糖類;磷酸氫二鉀是緩沖劑;伊紅與美藍同時作為抑制性(抑制革蘭氏陽性菌的生長)和指示劑,在酸性條件下,二者結合形成黑色沉淀;瓊脂為凝固劑。
伊紅為酸性染料,美藍為堿性染料,細菌分解乳糖產酸時,如大腸埃希氏菌,細菌帶正電荷,可以與帶負電的酸性染料伊紅結合染上伊紅的顏色,再與美藍反應而形成黑色菌落;如果細菌因產堿性物質較多,帶負電荷時與帶正電的堿性染料美藍結合使得菌落呈藍色。細菌產酸量較大時,染料可析出結晶形成綠色金屬光澤。
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EMB的質量控制
培養基質控(參照GB4789.28-2013附錄E)
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用1μL接種環將新鮮菌液劃線接種EMB瓊脂平板,36℃±1℃培養18h-24h。
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下面我們再展示一下不同菌株在EMB平板上的形態特征??筛爬橐韵氯悾?/span>
分解乳糖的典型菌落為中心紫黑色帶或不帶金屬光澤。
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不分解乳糖的菌落為無色或淡粉色。
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有的細菌因產生堿性物質較多,而出現藍色菌落。
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參考文獻:
蔣原.食源性病原微生物檢測技術圖譜[M]. 北京:科學出版社, 2019 166-168
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GB 4789.6-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗;
GB 4789.38-2016食品安全國家標準 食品微生物學檢驗大腸埃希氏菌計數;